Pour la réaction en chaîne par polymérase pour amplifier l`ADN correctement, vous avez besoin de deux amorces correctement faites, ou des chaînes courtes de nucléotides qui sont complémentaires à la première partie du segment d`ADN qui est en cours de copie. PCR est utilisée pour une gamme d`applications qui vont de l`application des lois à l`ingénierie génétique. Il consiste à prélever un échantillon d`ADN double brin, fondre pour briser l`ADN en brins distincts, attacher les amorces aux simples brins, puis étendre les amorces pour former deux morceaux d`ADN double brin. Ce processus est répété afin d`obtenir un échantillon plusieurs fois la concentration de l`original.
L`amorce sens que vous allez faire doit correspondre avec l`ADN sur le côté opposé, ou brin complémentaire. En d`autres termes, elle doit comprendre les premiers nucléotides de la séquence d`intérêt. L`amorce inverse doit se lier à la fin de votre gène d`intérêt et imiter votre brin complémentaire.
L`utilisation d`un traitement de texte ou d`un programme plus spécialisé pour l`ADN, regardez la séquence d`ADN que vous souhaitez amplifier. Prenez note des 18-24 premières paires de bases et les 18-24 dernières paires de bases. Ils ne doivent pas être trouvées ailleurs dans votre échantillon d`ADN, ce qui pourrait être commun pour les zones qui se répètent. Si cela se produit, vous allez vous retrouver avec la liaison de votre amorce à de multiples domaines au sein de votre échantillon et les résultats de PCR de longueur variable.
Notez les premiers et derniers segments d`ADN que vous étiez en train de regarder dans la première étape. Par exemple, disons que la séquence commence a ATGGAATTCACGATCGATCGT et le dernier était GGGTGCGAACACGGACTTAG. Dans cet exemple, nous sommes d`amorçage pour le début et la fin d`un gène particulier.
Prendre la première 18-24 paires de bases séquence (dans l`exemple, il est ATGGAATTCACGATCGATCGT) et l`insérer dans un autre document pour faire l`amorce sens. Enregistrez-le sous le nom de la région que vous voulez amorcer et le fait qu`il est une amorce sens.
Notez les 18-24 dernières paires de bases de la séquence d`intérêt (GGGTGCGAACACGGACTTAG dans l`exemple) pour créer l`amorce inverse. Écrire les nucléotides complémentaires de la séquence qui représente l`autre côté. Chacune des quatre bases d`un nucléotide paires avec seulement une autre base adénine (A) avec la thymine (T) et la cytosine (C) avec la guanine (G). Une fois que vous avez l`autre brin complémentaire, vous voulez inverser l`ordre de tous les nucléotides de la chaîne en le réécrivant dans la direction opposée. Lorsque cela est terminé, prenez votre nouvelle séquence complétée et inversée et l`enregistrer dans un document correctement étiquetés.
Allez sur le site de votre fournisseur et insérer la séquence avec le compte correspondant de facturation (habituellement attaché à un laboratoire), la concentration et d`autres modifications spéciales. Passer votre commande.
