La préparation d`un cocktail d`inhibiteurs de protéase

inhibiteurs de la protéase

• Faire aprotinine, leupeptine et pepstatine à concentraions actions de 100uM (micromolaire).

  L`aprotinine est disponible sous forme de solution à une concentration stock de 100mm.

  
  
  
  
  

  Pour faire 1 ml (millilitres) de 100 uM, dissoudre 1UL (microlitre) dans 999ul de PBS 1X (Physiological Solution tampon).

  Leupeptine est disponible sous forme d`une poudre. Le poids moléculaire du leupeptine est 475.6. Dissoudre 100ug (microgrammes) de poudre dans 2ml d`eau pour faire la concentration du stock de 100 uM.

  Pour faire Pepstatin, dissoudre 100ug de poudre pepstatine dans 1,45 ml d`eau pour obtenir une concentration stock de 100 uM.

  Tous ces éléments peuvent être soit mélangés ou stockés individuellement à moins 80 degrés Celsius.

• Faire PMSF (phénylméthyl fluorure de sulfonyl) au magasin de 100mm. PMSF se présente sous la forme de poudre. Le poids moléculaire du PMSF est 174,19. Dissoudre 10 mg de PMSF dans 572 ul de 100 pour cent d`éthanol et stocker à 4 degrés Celsius. Il est sensible à la lumière et doit être stocké dans l`obscurité.

  Ceci est ajouté au tampon de lyse juste avant utilisation.

• Mélanger ensemble les protéases aux concentrations requises. En général, ils sont dilués d`un facteur 100 pour l`utilisation.