Différence entre elisa directe et indirecte

Dans le test ELISA direct, un anticorps primaire est maintenue sur les parois d`une plaque de microtitrage. Lorsque l`échantillon suspecté de contenir l`antigène est ajouté, il y a une réaction antigène-anticorps. Ensuite, un anticorps secondaire lié à une enzyme qui est capable de réagir avec l`antigène est ajouté. Si l`antigène est présent dans l`échantillon, il se lie à cet anticorps lié à une enzyme. Quand un substrat incolore est ajoutée, si une couleur se développe, il indique la présence de l`antigène. Dans le test ELISA indirect, l`antigène est maintenue sur les parois de la microplaque. Quand un échantillon suspecté de contenir des anticorps est ajoutée, une réaction antigène-anticorps se produit. Ensuite, un anticorps secondaire lié à une enzyme capable de réagir avec la zone non liée de l`anticorps est ajouté. Lorsque le substrat incolore est ajoutée, elle conduit à un développement de la couleur si l`échantillon contient des anticorps utilisés.

Une large gamme d`anticorps secondaires marqués sont disponibles dans le commerce. En outre, il est possible de créer plusieurs anticorps primaires dans une espèce donnée et utiliser la même anticorps secondaire pour la détection. Cela rend le test ELISA indirect facile à réaliser. Dans l`ELISA direct, les anticorps primaires doivent être spécifiquement préparés à réagir avec l`antigène spécifique suspecté d`être présent dans l`échantillon. Cela rend l`ELISA direct désavantageuse par rapport à l`épreuve indirecte.

Le test ELISA direct est rapide en comparaison avec le test indirect parce qu`il utilise seulement un seul anticorps. Le test ELISA indirect nécessite une étape supplémentaire d`incubation avec un second anticorps au cours de la procédure d`essai, ce qui provoque un retard dans l`obtention des résultats.

Le test ELISA direct est moins sensible que la forme indirecte du test, car il y a beaucoup moins d`amplification de signal. En outre, l`étiquetage de l`anticorps primaire avec une enzyme peut altérer son profil de immonoreactivity. Dans le cas du test ELISA indirect, l`anticorps primaire ne soit pas marqué et, par conséquent, il conserve son immunoréactivité. Par ailleurs, chaque anticorps primaire a plusieurs épitopes qui peuvent se lier avec l`anticorps secondaire, ce qui permet l`amplification du signal, ce qui améliore la sensibilité de la méthode. Cependant, il existe un risque de réactivité croisée entre l`antigène et l`anticorps secondaire, ce qui conduit à une erreur dans les résultats. Il n`y a pas une telle possibilité dans la méthode ELISA directe.