Comment faire des gels de polyacrylamide

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    Bien que vous pouvez utiliser des gels de polyacrylamide pour la séparation de l`ADN, ils sont mieux adaptés pour la séparation des protéines et la caractérisation. Ils sont largement utilisés pour étudier le poids moléculaire, la charge, la structure et la pureté des protéines. La mobilité électrophorétique des protéines permet de faire voyager à travers le réseau de polymères d`acrylamide lorsque le courant est appliqué. Séparer les protéines en fonction de leur taille.

    Choses que vous devez

    • Des plaques de verre
    • Peigne
    • Spacer
    • Pinces
    • Seringue
    • Gants de sécurité
    • 150 ml flacon
    • 26,6 mL de 29% Acrylamide plus 1% N, N-méthylènebisacrylamide
    • 52,7 mL d`eau
    • 20 ml de 5X Tris / BorateEDTA (TBE) Buffer
    • 0,7 ml de 10% Persulfate d`ammonium
    • 35 microlitres de TEMED

    • Mettez des gants. Bien nettoyer et sécher le verre plaques, peigne et entretoises.




    • Mettez la plus grande plaque sur une surface propre et sèche. Placez les entretoises sur les deux côtés et couvrir avec une plus petite assiette. Alignez soigneusement les plaques avec les entretoises sur deux côtés et le fond. Fixer les trois côtés des plaques pour sceller et de les tenir ensemble.

    • Calculer la quantité de volume de gel nécessaire pour la taille des plaques et de l`épaisseur des entretoises.

    • Déterminer pour cent de solution de polyacrylamide nécessaire pour votre expérience. Pour 100 ml d`un gel de Polyacrylamide à 8%, mélanger 26,6 ml de 29% d`acrylamide plus 1% N, N-méthylènebisacrylamide, 52,7 ml d`eau, 20 ml de 5 X TBE et 0,7 mL de 10% Persulfate d`ammonium dans un petit flacon. Ajouter 35 microlitres de TEMED à la solution et mélanger doucement. Travaillez rapidement après l`ajout de TEMED. Remplir une seringue avec la solution soigneusement et distribuer son contenu dans l`espace vide entre les plaques jusqu`à ce que la solution soit légèrement en dessous de la plaque inférieure.

    • Insérez soigneusement le peigne bien former entre les grandes et les petites plaques sur le dessus des plaques assemblées. Laissez le gel polymériser complètement pendant environ une heure.

    • Retirez délicatement le peigne. Rincer les puits avec 1X TBE pour les nettoyer. Retirer les pinces et placer le gel dans l`appareil d`électrophorèse selon les instructions du fabricant. Le gel de polyacrylamide est prêt à utiliser pour votre expérience.

    Conseils Avertissements

    • Nettoyer les plaques de verre à fond avant de verser le gel. Les taches ou de l`huile sur le plaqué se traduira par des bulles d`air et d`empêcher la migration de l`échantillon.
    • Parce que l`acrylamide est toxique, prendre plus grand soin lorsque vous travaillez avec elle. Toujours porter des gants lors de la manipulation acrylamide sous une forme quelconque. Utiliser une pipette automatique pour mesurer la solution d`acrylamide et de mettre sur un masque lors de l`utilisation de poudre d`acrylamide.
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