Comment calculer les titres de virus

Mettez des gants, remplir 10 tubes de culture avec 9 ml de bouillon et de les étiqueter "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3," et ainsi de suite jusqu`à ce que "10 ^ -10." Ces tubes sont utilisés pour les dilutions en série virales. Puisque les virus peuvent atteindre des concentrations incroyablement élevé, vous avez besoin de les diluer afin de les compter effectivement. Chaque tube représente une dilution de dix fois du virus.

Prélever 1 ml de la culture de virus que vous voulez titrer et le transférer dans le tube intitulé «10 ^ -1" avec une pipette. Mélanger le tube bien. Ceci est votre première dilution de dix fois.

Prendre 1 ml de la culture mixte de votre tube étiqueté "10 ^ -1" et de le transférer avec une nouvelle pipette pour le tube suivant, intitulé "10 ^ -2." Mélanger ce tube ainsi.

Continuer ce modèle pour créer une série de dilution en série. Vous allez vous retrouver avec 9 tubes de 9 ml et 1 tube de 10 ml. Les charges virales dans vos tubes seront dilués entre 10 fois (votre premier tube) ou 100 fois (votre deuxième tube) à dix milliards de fois (votre tube final).

Prenez 10 tubes de gélose molle de tryptone et 10 boîtes de Pétri et les étiqueter pour correspondre avec vos tubes de dilution en série.

Desserrez les bouchons de sorte qu`ils ne sautent dans la chaleur, puis placez vos tubes d`agar dans un bécher d`eau bouillante. Ce va fondre l`agar de sorte que vous pouvez verser dans des boîtes de Pétri.

Transférez vos tubes à un ensemble de bain d`eau chaude à un minimum de 45 degrés Celsius. Cela permettra d`assurer que votre agar ne se solidifie pas dans les tubes avant d`avoir une chance de le verser dans une boîte de Pétri.

Ajouter deux gouttes de culture bactérienne à votre agar et mélanger délicatement. Ce sont les bactéries qui seront tués, ce qui vous permet de compter le nombre de particules virales dans une solution particulière.

Ajouter 1 ml de chaque dilution en série à son tube d`agar correspondant tandis que les tubes sont encore dans le bain d`eau chaude. Par exemple, 1 ml de votre 10 dilution ^ -1 série devraient aller dans le tube agar marqué "10 ^ -1."

Mélanger chaque tube, puis versez chaque tube dans la plaque de Pétri avec l`étiquette correspondante. Cela va créer une mince couche d`agar qui a été inoculé avec des bactéries et des virus dans chaque plaque. Laissez les plaques se développent pendant une nuit dans un incubateur.

Prenez vos plaques de l`incubateur et les examiner. Vous devriez voir les zones nuageuses tout au long de la plaque où les bactéries ont augmenté, sauf pour de petites taches claires appelées plaques. Ces plaques sont des taches de bactéries mortes, et chaque plaque représente un virus.

Trouver une plaque qui a entre 30 et 300 plaques et compter le nombre exact de plaques sur cette plaque.

Prenez le nombre de plaques dans votre assiette et multiplier par 10. Si vous avez compté 157 plaques, vous obtiendrez 1570.

Multiplier le nombre que vous avez obtenu à l`étape précédente par l`inverse du nombre sur votre tube de dilution. Par exemple, si la plaque que vous avez sélectionné a été la plaque 10 ^ -5, vous multipliez 1570 par 10 ^ 5 pour obtenir 157000000. Ce nombre final est votre titre de virus, et représente le nombre de virus par ml de votre culture d`origine.