Isoler les bactéries du sol est une première étape importante dans de nombreuses expériences de microbiologie. Une fois qu`ils sont isolés, les bactéries peuvent être analysés plus pour déterminer les choses, telles que leurs espèces et leur fonction dans l`environnement du sol. Même une petite quantité de sol peut contenir des millions de bactéries, ce qui rend nécessaire de diluer un échantillon de sol avant d`isoler les bactéries de l`échantillon.
Choses que vous devez
- Eau distillée
- cylindre gradué
- bouteille stérile avec couvercle
- échantillon de sol
- 4 tubes à essai stériles plafonnés
- 15 stériles 1 ml. pipettes
- gélose nutritive préparée à environ 45 degrés C
- 10 boîtes de Pétri stériles
- Marqueur permanent
Mesurer 100 ml. l`eau distillée dans le cylindre gradué et l`ajouter au flacon stérile.
Peser 1 g de l`échantillon de sol et l`ajouter à la bouteille d`eau distillée. fermer hermétiquement la bouteille et secouer pour bien mélanger la solution.
Etiqueter les tubes à essai stériles "10 ^ -3," "10 ^ -4," "10 ^ -5," et "10 ^ -6." Ajouter 9 ml d`eau distillée dans chacun des tubes, en utilisant une des pipettes.
Transférer 1 ml de la solution dans le flacon au tube étiqueté "10 ^ -3," en utilisant une nouvelle pipette. Boucher le tube et agiter doucement jusqu`à ce que la solution est bien mélangée.
Transférer 1 ml de la solution dans le "10 ^ -3" le tube d`essai à la "10 ^ -4" tube avec une nouvelle pipette. Boucher le "10 ^ -4" tube et agiter pour mélanger. Répétez cette méthode pour transférer la solution de la "10 ^ -4" Tube à "10 ^ -5" le tube puis de la "10 ^ -5" Tube à "10 ^ -6" tube.
Plate trois échantillons chacun de la "10 ^ -4," "10 ^ -5" et "10 ^ -6" tubes. Utiliser une nouvelle pipette pour transférer 1 ml de solution du tube dans une boîte de Pétri. Ajouter environ 15 ml de gélose nutritive à la plaque- puis mettre le couvercle sur la plaque et agiter doucement pour que l`agar recouvre le fond de la plaque.
Faire une plaque de commande en mettant 1 ml d`eau distillée dans une boîte de Pétri, en utilisant une nouvelle pipette. Ajouter agar- mettre le couvercle sur et agiter la plaque.
Laissez les boîtes de Pétri en position verticale jusqu`à ce que l`agar a fixé. Puis inverser les plaques et incuber --- soit dans un incubateur ou à la température ambiante --- pour aussi peu que 24 heures et jusqu`à cinq jours.
Retirer les plaques de l`incubateur après que la quantité souhaitée du temps d`incubation. Compter les colonies bactériennes sur des plaques contenant environ 30 à 300 colonies. Utilisez un marqueur permanent pour marquer les colonies que vous avez déjà compté afin d`éviter de compter les mêmes colonies deux fois.
Diviser le nombre de colonies comptées par la dilution ---"10 ^ -4," "10 ^ -5" ou "10 ^ -6"--- De la solution du sol pour chaque plaque. Trouver le nombre de bactéries cultivables dans le programme original du sol par la moyenne des résultats de chaque plaque dénombrable.
