Composants de tampons de lyse

Tampons stabilisent le pH tandis que les cellules sont lysées. Tris-HCL est une mémoire tampon commune pour tamponner à un pH de 8 si le pH est souhaité, l`HEPES est un autre produit chimique de tampon commun dans ces expériences. le chlorure de sodium, le sel peut également être inclus pour augmenter la force ionique, la concentration totale des solutés à l`extérieur des cellules. Cette dernière est importante, car l`eau peut diffuser à travers les membranes cellulaires des régions de concentration de soluté faible pour les régions de concentration de soluté élevée.

Le détergent est le principal ingrédient qui dissout la membrane cellulaire, de sorte que le contenu puisse s`échapper. Les détergents sont des molécules amphipathiques, à savoir, des molécules ayant une extrémité qui interagit facilement avec les molécules d`eau tandis que l`autre hydrophobe ou "craignant l`eau" fin ne fait pas. Ils peuvent dissoudre les graisses par les micelles, formant de petits agrégats, où les queues hydrophobes des molécules de détergent pointent vers l`intérieur en direction des molécules de graisse. les détergents courants comprennent le dodécylsulfate de sodium ou le SDS, le NP-40 et Triton X.

des tampons de lyse comprennent également typiquement des agents chélateurs tels que l`acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) ou l`acide éthylèneglycol tétraacétique (EGTA). Ces produits se lient aux ions métalliques avec une charge 2 (par exemple, magnésium et calcium), ce qui les rend indisponible pour d`autres réactions. Beaucoup DNases (protéines qui mâchent l`ADN) et des protéases (protéines qui découpent d`autres protéines) ont besoin des ions magnésium à la fonction, donc en les privant de cet ingrédient clé, EDTA et EGTA aident à réduire le niveau de la protéase ou activité DNAse. Ils n`excluent pas complètement, cependant, et certaines protéases ne dépendent pas de cofacteurs de magnésium, de sorte que les tampons de lyse peuvent inclure également des produits chimiques appelés inhibiteurs de la protéase, qui se lient aux protéases et les empêchent de fonctionner correctement.

lyse alcaline est une technique très courante pour la purification de plasmides à partir de bactéries. Cette méthode implique trois solutions. La première contient du glucose, du tampon Tris-HCl, l`EDTA et RNases. Le glucose crée une concentration de soluté élevée en dehors des bactéries afin qu`ils deviennent un peu molle, ce qui les rend plus faciles à lyse- EDTA et la fonction tris-HCL comme déjà décrit, tandis que le RNAse va mâcher tout ARN dans la cellule pour l`obtenir hors du chemin. La deuxième solution lyses effectivement les cellules. Celle-ci contient un détergent SDS et du NaOH, ce qui augmente le pH à 12 ou plus, dénaturant les protéines dans la cellule et causer l`ADN de se séparer en brins simples. La troisième solution contient de l`acétate de potassium pour restaurer le pH à un niveau plus neutre de sorte que les brins d`ADN de plasmide peuvent revenir ensemble. Dans l`intervalle, les protéines dénaturées agglutiner et précipitent, tandis que les ions sulfate sont dodécyle ainsi que les ions de potassium pour former un composé insoluble qui précipite également de la solution.