chromatographie en phase liquide à haute performance, ou HPLC, est une technique utilisée pour séparer des composés à partir d`une solution mixte. Un tube métallique rempli de billes de silice, appelée colonne de HPLC, est utilisée pour séparer la solution avant qu`elle ne soit détectée par le détecteur HPLC. Un double pic du détecteur de lecture en général implique que quelque chose d`autre contamine le système. La plupart du temps, le problème réside dans la colonne HPLC.
Déterminer quel type de solvant est injecté dans le système HPLC. Si le solvant est plus forte que la phase mobile liquide qui passe à travers, le fractionnement de pointe peut se produire. Une solution simple consiste à utiliser le même solvant dans la phase mobile en tant que solvant dans l`échantillon. Si le problème persiste, la colonne HPLC peut être contaminée.
Laver la colonne par pompage 100 pour cent du méthanol ou de l`acétonitrile bien que le système HPLC pendant au moins 15 minutes. Cela permettra d`éliminer les matériaux fortement attachés liés à la colonne. Inverser la colonne et effectuer la même opération avec le même solvant. Ce processus permettra d`éliminer toute matière particulaire qui peut être encombrer la fritte-un filtre situé à l`avant de la colonne. Si la chromatographie continue à afficher des pics doubles, la colonne a été salie avec des contaminants solides.
Avec la colonne dans le sens inverse, la pompe 25 ml d`eau à 1 ml par minute. rincer ensuite la colonne avec 25 ml d`isopropanol, le chlorure de méthylène et d`hexane, successivement. Reconnecter la colonne dans le bon sens et rincer la colonne avec 25 ml de solvant de phase mobile. Si le double pic persiste, remplacer la colonne.
