Les étapes à une électrophorèse sur gel d`agarose

Recueillir tous les éléments nécessaires et les nettoyer avec 70 pour cent d`éthanol. Les articles comprennent des plateaux de gel de coulée, du ruban adhésif, agarose de qualité laboratoire, flacons ou bouteilles, courant de tampon (Tris-borate-EDTA, TBE) à une concentration 10X, le bromure d`éthidium, le colorant et le chargement de l`échantillon à analyser. Assurez-vous également que vous avez un réservoir d`électrophorèse sur gel et la source d`alimentation. L`agarose est préparée en pesant la quantité appropriée à la taille de l`ADN à analyser, le mélange avec le tampon TBE et en faisant fondre dans un four micro-ondes. En général, une solution de 1-2 pour cent est suffisant pour couvrir la plupart des tailles de l`ADN étudié en biologie moléculaire de routine. Les petites ADNs nécessiteront des gels plus concentrés, tandis que les plus grands, il faudra des gels plus diluées. La solution d`agarose est mélangé avec du bromure d`éthidium qui se lie à l`acide nucléique au cours de la procédure d`électrophorèse. Cette solution est versée dans le bac de coulée du gel, un peigne bien coulée est inséré, et on laisse le mélange se solidifier.

Le gel est retiré de son plateau de coulée et plongé dans une cuve d`électrophorèse sur gel contenant un tampon en cours d`exécution. Les échantillons à analyser sont mélangés avec colorant de charge et chargés dans des puits dans le gel créé par le peigne. Un marqueur ou une échelle est également inclus, pour permettre à l`enquêteur de suivre les progrès de l`électrophorèse et de déterminer la taille des fragments générés plus tard. Un courant électrique est alors appliqué sur le gel, ce qui force l`échantillon à migrer d`une extrémité du gel à l`autre. Pendant ce processus, les acides nucléiques dans l`échantillon se séparent en des fragments de différentes tailles, avec des molécules plus grandes restant proche du puits, et les petites molécules qui se déplacent vers l`autre extrémité du gel.

Une fois la procédure d`électrophorèse terminée, le gel est retiré de la cuve et placée sur un transilluminateur UV, qui éclaire les fragments d`acide nucléique qui se sont liées au bromure d`éthidium fluorescent. Une photographie de cette prise et les bandes d`acides nucléiques peut être dimensionné en fonction de la distance migré à travers le gel. L`échelle sera séparé en bandes de tailles connues aussi bien, et peut être utilisé pour guider l`enquêteur lors de l`analyse.